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Southern blotting principle,procedure and application in hindi


Southern blotting principle,procedure and application


Southern blotting principle in hindi


* दक्षिणी ब्लोटिंग आरएफएलपी (प्रतिबंध खंड लंबाई बहुरूपता) का एक उदाहरण है। इसे Edavard M. ने दक्षिणी (1 975) द्वारा विकसित किया था। दक्षिणी ब्लोटिंग अन्य समान अणुओं से डीएनए के विशेष आकार की पहचान के लिए एक संकरण तकनीक है। यह तकनीक जेल इलेक्ट्रोफोरोसिस द्वारा डीएनए टुकड़ों को अलग करने के सिद्धांत पर आधारित है और लेबल probe संकरण द्वारा पहचाना गया है।

* असल में, डीएनए टुकड़े इलेक्ट्रोफोरोसिस के दौरान आकार और चार्ज के आधार पर अलग होते हैं। नायलॉन झिल्ली पर स्थानांतरित करने के बाद पृथक डीएनए टुकड़े, वांछित डीएनए विशिष्ट डीएनए जांच का उपयोग करके पता चला है जो वांछित डीएनए के पूरक है।

* एक संकरण जांच एक छोटा (100-500 बीपी), एकल फंसे डीएनए है। जांच को मार्कर के साथ लेबल किया जाता है ताकि हाइब्रिडाइजेशन के बाद उनका पता लगाया जा सके।

Southern blotting procedure in hindi


* प्रतिबंध पचाना: पीसीआर द्वारा आरई एंजाइम और प्रवर्धन द्वारा।

 * जेल इलेक्ट्रोफोरोसिस: एसडीएस जेल इलेक्ट्रोफोरोसिस (SDS gel electrophoresis)।

 * Denaturation: एचसीएल और NaOH के साथ इलाज।

 * बीएसए में केसिन के साथ बेकिंग और अवरुद्ध करना
लेबल की जांच का उपयोग कर संकरण।

 * Autoradiogram द्वारा विजुअलाइजेशन।


चरण I: प्रतिबंध पाचन


डीएनए उपयुक्त प्रतिबंध एंजाइम का उपयोग करके खंडित किया गया है। आरई विशिष्ट साइट उत्पन्न टुकड़ों पर डीएनए काटता है।
प्रतिबंध पाचन द्वारा प्राप्त डीएनए के टुकड़ों की संख्या पीसीआर द्वारा बड़ाई जाती है।

चरण II: जेल इलेक्ट्रोफोरोसिस


वांछित डीएनए टुकड़े जेल electrophoresis द्वारा अलग किया जाता है।

चरण III: denaturation


इलेक्ट्रोफोरोसिस के बाद एसडीएस जेल को फिर डबल स्ट्रैंडेड डीएनए टुकड़ों को नकारने के लिए क्षार (NaOH) या एसिड (एचसीएल) में भिगो दिया जाता है।
डीएनए तार अलग हो जाते हैं।

चरण IV: ब्लॉटिंग


डीएनए के अलग-अलग तारों को तब ब्लोटिंग की प्रक्रिया द्वारा सकारात्मक चार्ज झिल्ली नायलॉन झिल्ली (नाइट्रोसेल्यूलोस पेपर) में स्थानांतरित किया जाता है।

चरण V: बेकिंग और अवरुद्ध करना


झिल्ली पर ब्याज के डीएनए के बाद, यह झिल्ली में ठीक करने के लिए आटोक्लेव पर पकाया जाता है।
झिल्ली को फिर केसिन या बोवाइन सीरम एल्बिनिन (बीएसए) के साथ इलाज किया जाता है जो झिल्ली की सभी बाध्यकारी साइट को संतृप्त करता है।

चरण VI: लेबल किए गए जांच के साथ संकरण


झिल्ली से बंधे डीएनए को लेबल वाली जांच के साथ इलाज किया जाता है
लेबल वाली जांच में रुचि के जीन के पूरक अनुक्रम होते हैं
जांच झिल्ली पर पूरक डीएनए के साथ बांधती है क्योंकि झिल्ली पर अन्य सभी गैर विशिष्ट बाध्यकारी साइट बीएसए या केसिन द्वारा अवरुद्ध कर दी जाती है।

चरण VII: Autoradiogram द्वारा विजुअलाइजेशन


जांच के साथ लेबल किए गए झिल्ली बाध्य डीएनए को autoradiogram के तहत देखा जा सकता है जो बैंड के पैटर्न प्रदान करता है।

Southern blotting की applications


* दिए गए नमूने में डीएनए का पता लगाने के लिए दक्षिणी ब्लोटिंग तकनीक का उपयोग किया जाता है।

* डीएनए उंगली मुद्रण दक्षिणी ब्लोटिंग का एक उदाहरण है।
पितृत्व परीक्षण, आपराधिक पहचान, पीड़ित पहचान के लिए प्रयुक्त जीन को अलग करने और पहचानने के लिए।

* प्रतिबंध खंड लंबाई polymorphism में प्रयोग किया जाता है

* डीएनए के अनुक्रम में उत्परिवर्तन या जीन पुनर्गठन की पहचान करने के लिए

* अनुवांशिक दोषों के कारण बीमारी के निदान में प्रयोग किया जाता है

* संक्रामक एजेंटों की पहचान के लिए प्रयोग किया जाता है


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