Dna sequencing and it's methods part 1st
Dna sequencing क्या है?
किसी dna में nucleotide के sequence को determine करने के process को dna sequencing कहते हैं।
आज, सही उपकरण और सामग्रियों के साथ, डीएनए का एक छोटा टुकड़ा sequence करना अपेक्षाकृत सरल है।
एक संपूर्ण जीनोम (एक जीव के सभी डीएनए) को sequence करना एक कठिन कार्य है। इसके लिए जीनोम के डीएनए को कई छोटे टुकड़ों में तोड़ने, टुकड़ों को sequence करने और sequences को एक लंबे समय तक "आम सहमति" में जोड़ना आवश्यक है।
इस लेख में, हम डीएनए sequencing के लिए उपयोग की जाने वाली विधियों पर एक नज़र डालेंगे। हम एक अच्छी तरह से स्थापित विधि, "Sanger Sequencing Method" पर ध्यान केंद्रित करेंगे और साथ ही साथ "Maxam Gilbert Method" की भी चर्चा करेंगे।
Methods of DNA sequencing in hindi
Sanger sequencing: chain termination method
लगभग 90000900 base pairs तक के डीएनए के क्षेत्र को regularly Sanger sequencing या chain termination method नामक विधि का उपयोग करके sequencing करते हैं। chain termination की एक विधि को ब्रिटिश जैव रसायनज्ञ Fred Sanger और उनके सहयोगियों ने 1977 में विकसित किया था।
Procedure
Sequence करने के लिए डीएनए एक स्ट्रैंड के रूप में तैयार किया जाता है।
* Sanger sequence एक targeted sequencing तकनीक है जो विशिष्ट डीएनए क्षेत्रों की तलाश करने के लिए ओलिगोन्यूक्लियोटाइड प्राइमरों का उपयोग करती है। Sanger sequence double stranded डीएनए की denaturation के साथ शुरू होता है।
* Single stranded डीएनए को ओलिगोन्यूक्लियोटाइड प्राइमरों से जोड़ा जाता है और डीओक्सिन्यूक्लियोटाइड ट्राइफॉस्फेट्स (डीएनटीपी) के मिश्रण का उपयोग करके बढ़ाया जाता है, जो आवश्यक आर्जिनिन (A), साइटोसिन (C), टायरोसिन (T), और गुनाइन (G) न्यूक्लियोटाइड बनाने के लिए double stranded structure प्रदान करता है। इसके अलावा, प्रत्येक न्यूक्लियोटाइड के लिए chain-terminating dideoxynucleotide triphosphates (ddNTPs) की एक छोटी मात्रा शामिल होती है।
* एक डीडीएनटीपी attach होने तक sequence डीएनटीपी के साथ विस्तार जारी रहता है। चूंकि डीएनटीपी और डीडीएनटीपी के अनुक्रम को जोड़ने का बराबर मौका होता है, इसलिए प्रत्येक sequence अलग-अलग लंबाई में समाप्त हो जाता है।
* प्रत्येक ddNTP (ddATP, ddGTP, ddCTP, ddTTP) में फ्लोरोसेंट मार्कर भी शामिल है। जब एक ddNTP विस्तारित sequence से जुड़ा होता है, तो बेस संबंधित न्यूक्लियोटाइड के आधार पर फ्लोरोसिस(lightning) करेगा। इससे A को green light, T को red light, G को black light, और C को ब्लू रंग से संकेत मिलता है।
* Sequence को पढ़ने के लिए उपयोग की जाने वाली automated मशीन फ्लोरोसेंट तीव्रता का पता लगाता है जिसका translation "peak" में किया जाता है। जब एक heterozygous variant की sequensing होती है, तो loci को समान तीव्रता के दो फ्लोरोसेंट रंगों से पकड़ा जाएगा। जब एक homozygous variant मौजूद होता है, तो अपेक्षित फ्लोरोसेंट रंग को नए base pair के रंग से पूरी तरह बदल दिया जाता है।
टिप्पणियाँ
एक टिप्पणी भेजें